CNtest 黃曲霉毒素總量免疫親和柱-中藥專用
(產(chǎn)品編號: QHZ103-ZY)
使用對象
CNtest免疫親和柱由中檢維康*自主開發(fā)的系列產(chǎn)品,廣泛地應用于中藥、糧食、食品、飼料、堅果、植物油、調(diào)味品和酒類等樣品的檢測,該方法具有操作簡單、準確性高,靈敏度高等特點。
CNtest黃曲霉毒素免疫親和柱-中藥專用柱是根據(jù)《中國藥典2020版-2351真菌毒素測定法》獨立開發(fā)的產(chǎn)品,它適用于藥典中黃曲霉毒素親和柱檢測方法。同時我們對部分檢測方法進行了優(yōu)化,為大家提供更好的解決方案。
原理
樣品經(jīng)提取液提取、過濾、稀釋,然后通過鍵合有黃曲霉毒素特殊抗體的免疫親和柱。此時,黃曲霉毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附, 用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將黃曲霉毒素從親和柱上洗脫下來。最后, 用HPLC或熒光計進行定量檢測。
儲存條件
該親和柱保存在2-8 °C條件下,絕對不能冷凍,保質(zhì)期為18個月。建議在室溫(18-30°C)下使用。
實驗溶液制備
1) 提取液,甲醇/水(7+3): 取70mL甲醇加30mL水,混合均勻。
2) 提取液, 乙腈/水(9+1): 取90mL乙腈加10mL水,混合均勻。
3) HPLC流動相, 甲醇-乙腈-水(20+18+62, v/v): 取200mL甲醇、180mL乙腈、 620mL水,混合均勻, 用0.22微米的尼龍篩過濾。
4) 標準溶液的配制: 取黃曲霉毒素混標(46304-U, B1和G1為1.0ug/mL,B2和G2為0.3ug/mL), 甲醇為稀釋液,配制標準品溶液。例如:取100uL標準品原液于10mL容量瓶中,用甲醇定容至10mL,那么, 黃曲霉毒素B1和G1為10ng/mL,黃曲霉毒素B2
和G2為3ng/mL.
注:配制好的標準品溶液2-8℃冷藏保存有效期為24h。
5) 淋洗緩沖液: 量取100mL 10X Clover淋洗緩沖液(貨號:C3007) 用900mL純水稀釋,混勻。
6) 中藥專用稀釋液: 量取100mL 10X Clover中藥專用稀釋液(貨號: C3008) 用900mL純水稀釋,混勻。
液相色譜條件
色譜柱: CNtestsil AFT-C18 4.6*250mm(5um)
流動相: 甲醇-乙腈-水(20+18+62, v/v)
流速: 0.8mL/min
檢測器: 熒光檢測器,激發(fā)波長360nm,發(fā)射波長450nm
進樣體積: 20~100uL
光化學衍生系統(tǒng): 光化學衍生器(254nm)
分析步驟
1 2020 版-2351 真菌毒素測定法-黃曲霉毒素測定法第一法和第二法:
1.1 樣品提取及稀釋:
準確稱取試樣15.0g于均質(zhì)杯中, 加入3g氯化鈉, 準確加入75.0mL甲醇-水(7+3),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min(攪拌速度大于11000r/min) 。 普通濾紙過濾或4000RPM離心5min,準確移取15.0mL濾液或上清液置于50mL容量瓶中, 用純水稀釋至50mL, 混勻。 用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,量取20mL濾液備用;或 4000RPM離心10min,量取20ml上清液備用。
1.2 樣品的凈化
將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確量取20mL處理好的樣品濾液或上清液注入玻璃注射器中,將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約3mL/min(1滴/秒)流速緩慢通過免疫親和柱, 直至2~3mL空氣通過柱體。以3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗柱子2次(必要時可以用淋洗緩沖液10mL淋洗,再用水10mL淋洗) ,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體。準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫, 控制2mL/min(1滴/秒) 流速, 收集全部洗脫液,混勻,注入HPLC檢測。
2 中檢維康優(yōu)化方法:
1.1 樣品提取及稀釋:
準確稱取試樣15.0g于50mL離心管中, 加入3g氯化鈉, 準確加入75.0mL乙腈-水(9+1),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min(攪拌速度大于11000r/min)。普通濾紙過濾或4000RPM離心5min,準確移取3.0mL濾液或上清液置于50mL離心管中, 加入27mL Clover中藥專用稀釋液稀釋, 混勻。 用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,量取20mL濾液備用。
注意: 如果樣品提取液用Clover中藥專用稀釋液稀釋后有大量固體沉淀產(chǎn)生,請改為Clover淋洗緩沖液稀釋樣品提取液。
1.2 樣品的凈化
將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確量取20mL處理好的樣品濾液注入玻璃注射器中,將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約3mL/min(1滴/秒)流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體。以3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗柱子,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體。 準確加入2.0mL色譜級甲醇洗脫(注:可以用1ml甲醇洗脫,提高方法檢測靈敏度) , 控制2mL/min(1滴/秒)流速,收集全部洗脫液,混勻,注入HPLC檢測。
注意事項
1) 樣品添加回收試驗時,標準品添加到樣品中,靜置 2 小時后或過夜,再進行樣品前處理,否則會出現(xiàn)回收率偏低的現(xiàn)象。
2) 不要隨便更改操作說明書中的操作步驟,如需更改要和本公司技術(shù)部聯(lián)系, 確認更改是否合理。
3) 操作步驟中,樣品過柱,淋洗,洗脫時,一定要控制好流速,不能太快,否則會使檢測結(jié)果偏低。
4) 如果將標準品直接過柱驗證回收率時,一定要確保標準上柱液中甲醇濃度不要超過 25%, 乙腈濃度不要超過 20%, 否則會影響柱子的吸附能力。
5) 試驗中使用的玻璃儀器等,一定要清洗干凈,尤其是用次氯酸等處理過的儀器,否則會使檢測結(jié)果偏低。
需要準備的設(shè)備及試劑(中檢維康提供)
C/N 編號 | 物品 |
PHRED | 美國奧拉 AURA 光化學衍生器 |
UVD | 科樂福 CLOVER 光化學衍生器 |
21022 | 科樂福 CLOVER 六位泵流操作架(配有 1 臺空氣泵, 6 個 10mL 針筒) |
20202 | 高速勻質(zhì)器,轉(zhuǎn)速可達 18,000 r/min ?22,000 r/min |
31955-C | 美國 CLOVER 微纖維濾紙(1.5um, 100 張/盒) |
31240-C | 折疊式槽紋濾紙(100 張/盒),或中速定性濾紙 |
36010-C | 一次性塑料燒杯(25/包) |
34000-C | 一次性測試管(250 支/包) |
36020-C | 塑料漏斗(10 個/包) |
46304-U | 黃曲霉毒素混合標準品 1.0mL (B1 和 G1 為 1.0ug/mL,B2 和 G2 為 0.3ug/mL) |
35016 | 色譜純級的甲醇(4 升/瓶) |
N546250-AFT | 中檢維康 CNtestsil AFT-C18 反相色譜柱 4.6*250mm (5um) |
玉米、飼料等基質(zhì)含有不同水平黃曲霉毒素的質(zhì)控樣品 | |
C3007-250 | 10X Clover 淋洗緩沖液 |
C3008-250 | 10X Clover 中藥專用稀釋液 |
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